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水體eDNA技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域

發(fā)布日期: 2021-12-10
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生物多樣性研究:

 

Thomsen[6]從丹麥的一個海洋生態(tài)系統(tǒng)中采集海水,利用環(huán)境DNA metabarcoding技術(shù)研究海洋魚類生物多樣性。在獲得的環(huán)境DNA中發(fā)現(xiàn)了15種不同的魚類,其中包括一些用傳統(tǒng)監(jiān)測方法很難發(fā)現(xiàn)的稀有物種。同時與9種傳統(tǒng)的海洋魚類調(diào)查方法比較,環(huán)境DNA檢測出的魚類多樣性與其他傳統(tǒng)方法相當(dāng),甚至優(yōu)于傳統(tǒng)方法。Thomsen[10]研究表明從湖泊、池塘和河流的少量水樣中直接獲得DNA,可以檢測并定量分析研究區(qū)域內(nèi)及瀕危淡水動物(兩棲類、魚類、哺乳類、昆蟲類和甲殼類)多樣性。同時表明通過池塘水中分離的DNA,利用第二代測序技術(shù)可以檢測到研究區(qū)域內(nèi)兩棲類和魚類群體,環(huán)境DNA可以作為監(jiān)測瀕危物種的工具,應(yīng)用于更廣泛的物種監(jiān)測中。

應(yīng)用環(huán)境DNA metabarcoding技術(shù)不僅可以針對當(dāng)前的生物多樣性進(jìn)行有效的評估,也可以對過去的動植物群落的多樣性進(jìn)行評估[11, 45]。Epp[11]通過對過去和現(xiàn)在的環(huán)境DNA進(jìn)行metabarcoding研究,所有目標(biāo)類群都能通過metabarcoding的方法檢測出來,但是類群之間和不同年代的環(huán)境樣品所檢測的結(jié)果存在較大變異范圍。

目前國內(nèi)在應(yīng)用環(huán)境DNA metabarcoding技術(shù)研究生物多樣性的報道還比較少。

 

外來入侵物種監(jiān)測:

 

目前外來入侵物種的情況日趨嚴(yán)重。當(dāng)外來物種入侵時,入侵物種很有可能破壞原本的生態(tài)平衡,使生態(tài)系統(tǒng)不完善,從而對本地物種的種類和數(shù)量產(chǎn)生影響[24]。但是在早期入侵階段外來入侵物種通常數(shù)量不多,使用傳統(tǒng)的檢測方法耗時且效率不高,難度高,不能及時被發(fā)現(xiàn)。這會導(dǎo)致外來入侵物種對本地生態(tài)平衡的危害達(dá)到最高值時才受到重視,為時已晚。環(huán)境DNA metabarcoding增強(qiáng)了對入侵物種早期監(jiān)測的可能性,可以有效地遏制物種入侵。

研究發(fā)現(xiàn)利用環(huán)境DNA metabarcoding可以從淡水中提取環(huán)境DNA,檢測出外來入侵物種的存在。Ficetola[24]最早將環(huán)境DNA metabarcoding應(yīng)用于物種監(jiān)測,他們使用特異性引物擴(kuò)增短線粒體DNA序列追蹤在受控環(huán)境和自然環(huán)境中一種入侵牛蛙(Rana catesbeiana)的存在,發(fā)現(xiàn)對環(huán)境中低密度的物種,使用metabarcoding技術(shù)仍然可以進(jìn)行快速有效的物種檢測。這是結(jié)合大規(guī)模測序和DNA條形碼技術(shù)的發(fā)展來進(jìn)行物種識別,為利用環(huán)境DNA監(jiān)測外來物種提供了新方法和新思路。Jerde[26]利用環(huán)境DNA研究美國芝加哥地區(qū)河流中的兩種入侵亞洲鯉科魚(Hypophthalmichthys molitrixH.nobilis),發(fā)現(xiàn)使用傳統(tǒng)電氣捕魚法檢測到一條魚需要93d的努力,而環(huán)境DNA metabarcoding方法檢測到目標(biāo)物種只需要0.174d。在亞洲鯉科魚種群密度很低的區(qū)域,只有環(huán)境DNA方法能夠檢測到這兩種魚[5]??梢姡h(huán)境DNA metabarcoding方法不僅在時間和資金成本上優(yōu)于傳統(tǒng)監(jiān)測方法,而且可以在種群密度很低的環(huán)境樣本中靈敏地檢測到入侵物種的存在。Piaggio[23]捕獲入侵佛羅里達(dá)州的半水棲物種緬甸巨蟒(Python bivittatus),放置于90L的水箱中評估水中環(huán)境DNA的降解速率,結(jié)果表明緬甸巨蟒的DNA96h以內(nèi)都可以檢測到。在佛羅里達(dá)州6個野外地點采集的水樣中,有5個地點的緬甸巨蟒環(huán)境DNA為陽性,這與緬甸巨蟒的野外分布結(jié)果一致。Takahara[7]使用環(huán)境DNA方法采集日本海岸以及周圍島嶼的70個水樣對一種入侵藍(lán)腮太陽魚(Lepomis macrochirus)進(jìn)行檢測。利用藍(lán)腮太陽魚的特異性引物(100bpCyt b片段)擴(kuò)增水環(huán)境DNA,結(jié)果表明70個池塘中有19個池塘遭受藍(lán)腮太陽魚的入侵。盡管魚的大小、習(xí)性等因素對實驗結(jié)果有一定影響,但使用環(huán)境DNA metabacoding提高了監(jiān)測入侵物種的準(zhǔn)確度。

 

稀有物種保護(hù)

 

通過水體中的環(huán)境DNA可以有效檢測水生脊椎動物,并且已在濕地和大型河流研究中得到證實[26]。利用環(huán)境DNA檢測河流中的稀有物種和隱秘物種可以增加調(diào)查結(jié)果準(zhǔn)確性,減少調(diào)查成本。Goldberg[8]利用metabarcoding技術(shù),通過收集快速流動的水體環(huán)境DNA樣本,對尾突角蟾(Ascaphus montanus)和愛達(dá)荷陸巨螈(Dicamptodon aterrimus)兩種物種進(jìn)行監(jiān)測。設(shè)計特異性引物尾突角蟾和愛達(dá)荷陸巨螈的線粒體Cyt b區(qū)域的85bp78bp片段,在5個不同物種密度的水樣中均成功進(jìn)行了PCR擴(kuò)增并靈敏地檢測到了目標(biāo)物種的存在。該研究還發(fā)現(xiàn)早春季節(jié)比早秋季節(jié)更難以檢測到兩棲類物種存在,推測可能是由于早春比早秋溫度更低,降低了生物代謝速率而導(dǎo)致。Foote[28]從海水中分離DNA,使用特異性引物擴(kuò)增線粒體DNA區(qū)域60—80bp的片段檢測水體中是否存在港灣鼠海豚(Phocoena phocoena),對控制條件下和自然條件下該物種進(jìn)行遺傳監(jiān)測。在一個樣地中檢測到長肢領(lǐng)航鯨(Globicephala melas),而該物種極少在研究海域被發(fā)現(xiàn),結(jié)果表明環(huán)境DNA的方法可用于檢測稀有物種。Wilcox[27]利用環(huán)境DNA結(jié)合定量PCR檢測了河流中的兩個稀有物種,美洲紅點鮭(Salvelinus fontinalis)和強(qiáng)壯紅點鮭(S.confluentus),同時發(fā)現(xiàn)定量PCR(qPCR)比傳統(tǒng)PCR更加靈敏,檢測概率更高。Rees[25]利用環(huán)境DNA和傳統(tǒng)的實地調(diào)查方法開展對英國保護(hù)物種冠北螈(Triturus cristatus)的監(jiān)測,野外調(diào)查發(fā)現(xiàn)有冠北螈分布的地點中,采集的水樣DNA中成功檢測出冠北螈的概率為84%。使用環(huán)境DNA方法監(jiān)測物種,對物種及其生存環(huán)境不會造成損害。隨著測序成本的下降,環(huán)境DNAmetabarcoding技術(shù)結(jié)合應(yīng)用在許多情況下甚至優(yōu)于一些傳統(tǒng)監(jiān)測方法,成為物種監(jiān)測方法的又一選擇[4]。

 

一些補充說明:

 

使用環(huán)境DNA監(jiān)測水生生物時,必須保證能獲得該環(huán)境的完整樣品并能進(jìn)行很好的保存[27]。水體的溫度和光照情況[53-54],水體的流速[55],物種密度和在環(huán)境中的停留時間[54],生物體的發(fā)育階段[55]等均會對環(huán)境中所取的DNA的量造成影響。Maruyama[56]對水體中DNA的半衰期進(jìn)行了研究和計算,發(fā)現(xiàn)魚類離開此水體后環(huán)境DNA的半衰期是6.3h,但對環(huán)境DNA降解速率及其影響因素,環(huán)境DNA在環(huán)境中存在時間的長短等問題仍缺乏充分的了解。

在采集溪流水樣時,由于許多溪流水來自于地下水,所以接觸到目標(biāo)生物脫落DNA的可能性較低。此外,由于溪流水水位淺而且是充分混合的,因此脫落的DNA被光降解的可能性更大,導(dǎo)致在溪流中檢測到的目標(biāo)物種密度會比較低[27]。使用環(huán)境DNA metabarcoding技術(shù)對淡水中的物種進(jìn)行檢測已被證實快速有效。淡水中水流較平和且流量小,所以準(zhǔn)確度高。與淡水相比,海洋生態(tài)系統(tǒng)中有單位體積中的生物量比例更大,海流和波浪的影響作用,以及鹽度對保存和提取環(huán)境DNA的影響都需要加以考慮。這些因素可能意味著海水中的環(huán)境DNA不太集中,且分散更迅速,提取DNA時比較困難,導(dǎo)致在海水中使用時只能針對一小片區(qū)域,并且對外來入侵物種的檢測效率不高。因此在海水中的使用還需要進(jìn)一步的研究與完善[28]。


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采樣器圖片.png


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